ELISA 标准曲线

规格

标签	值
版本	2.2.0（更新于 2026-04-10）
开发者	Labii Inc.
类型	章节
支持配置	是

概述

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于孔板的检测技术，用于检测和定量肽、蛋白质、抗体和激素等物质。传统 ELISA 数据分析需要使用多种外部工具，例如使用 Excel 准备数据、使用 GraphPad 拟合曲线；每次实验可能需要花费数小时。Labii 的 ELISA Standard Curve 小插件将孔板布局设计、原始数据录入、标准曲线拟合和浓度预测整合到单个 ELN 工作流程中，无需使用第三方软件。只需点击几下，即可使用多种回归方法拟合标准曲线，并自动计算样品浓度及相关统计数据。

使用场景

• 蛋白质定量 — 根据标准曲线确定生物样品中蛋白质、抗体或激素的浓度
• 药物开发 — 在药代动力学和药效学研究中定量化合物或药物浓度
• 免疫测定分析 — 测量血清、血浆或细胞培养上清液中的抗体滴度或细胞因子水平
• 质量控制 — 通过监控不同实验中的标准曲线拟合质量、SD 和 CV 来验证检测性能
• 合规工作流程 — 在符合 21 CFR Part 11 的 ELN 中维护可追溯、可供审计的 ELISA 记录

界面

只读视图

只读视图以结构化布局显示已完成的 ELISA 分析，包括带最佳拟合线的标准曲线图、拟合方程，以及可排序的结果表。结果表列出每个样品的平均吸光度、标准差（SD）、变异系数（CV）和计算得到的浓度。

只读视图显示标准曲线图以及每个样品包含 SD 和 CV 的浓度结果

编辑视图

编辑视图提供包含 Layout 和 Data 两个输入阶段的 96 孔板界面。在 Layout 阶段，用户通过分配孔位角色（标准品、空白、样品）并放置 CONC 行标签或列标签来定义孔板布局。在 Data 阶段，用户在相应孔中输入原始吸光度读数。两个阶段完成后，点击 Analysis 按钮即可启动自动分析流程。

配置

点击小插件标题中的 Edit 图标打开配置面板，并调整以下设置。

设置

• Concentration Unit — 结果和图表坐标轴中显示的浓度单位（例如 ug/ml、ng/ml、pg/ml）
• Optical Density (OD) — 用于吸光度测量的波长。默认为 450 nM
• Dilute Factor — 为计入样品稀释而应用于计算浓度的倍数。默认为 1
• Data Transform — 曲线拟合前应用于浓度值的转换：
  • x — 不转换（原始值）
  • log(x) — 浓度的自然对数
  • 10^x — 浓度的反对数（10 的幂）
• Fit Method — 用于拟合标准曲线的回归模型。默认为 linear：
  • linear — 拟合直线：$y = mx + c$
  • exponential — 拟合指数曲线：$y = ae^{bx}$
  • logarithmic — 拟合对数曲线：$y = a + b\ln x$
  • power — 拟合幂律曲线：$y = ax^b$
  • polynomial — 拟合多项式曲线：$y = a_nx^n + \ldots + a_1x + a_0$

信息

对于大多数标准 ELISA 方案，使用不进行数据转换的线性回归即可满足要求。对于动态范围较宽的检测，请使用对数拟合或 log(x) 转换。

其他功能

准备布局

此小插件支持 96 孔板。请使用以下三种输入方式之一定义孔板布局：

点击 Edit Plate 打开孔位编辑器界面

使用以下标签分配孔位角色：

• CONC — 将其设置为行标签或列标签，以沿该行或列定义一系列标准浓度
• STD — 将孔标记为标准品
• BLANK — 将孔标记为空白
• 其他所有标签均视为样品标识符；重复标签视为重复测量
• 将孔留空可将其排除在分析之外

根据需要点击孔上的 edit 图标，更新其单独的稀释倍数（默认为 1）

也可以直接从 Excel 或 Word 粘贴布局值，或者拖放表格文件以自动导入布局

注意

CONC 必须放在行标签或列标签中，而不能放在数据单元格中，才能沿该行或列正确定义标准浓度系列。

准备数据

在小插件中切换到 Data 输入模式

从酶标仪输出中复制吸光度读数，并将其粘贴到相应孔中；也可以手动输入数值

将孔留空可从分析中排除该数据点

执行分析

点击 Analysis 按钮运行完整的自动化流程。分析可在数秒内完成，并按以下顺序执行：

1. 计算空白吸光度平均值 — 计算所有标记为 BLANK 的孔的平均值，得到背景值
2. 背景扣除 — 从每个数据点中减去空白平均值，得到归一化吸光度值
3. 计算标准品平均值 — 计算同一浓度下双孔或三孔标准品的平均值，并计算标准误差
4. 曲线拟合 — 将所选回归方法和数据转换应用于标准品的浓度-吸光度数据对，并显示拟合方程
5. 标准曲线图 — 绘制平均吸光度（y 轴）相对于浓度（x 轴）的图，并叠加最佳拟合曲线
6. 浓度计算 — 通过拟合模型反算每个样品的平均吸光度，得到浓度，然后乘以稀释倍数
7. SD 和 CV — 计算每个样品的标准差和变异系数，并显示在可排序的结果表中

观看嵌入式媒体

最佳实践

• 对样品进行重复测量 — 对每个标准品和样品进行双孔或三孔检测。CV 高于 20% 表示可能存在移液错误、污染、温度变化或孵育期间蒸发。所有孵育步骤均应使用孔板盖。
• 每块孔板都应包含标准曲线 — 操作人员技术、移液、孵育条件和温度会在不同批次间变化；标准曲线无法在不同孔板之间可靠复用。
• 设置阳性对照 — 每块孔板使用已知浓度的对照样品，以确认 ELISA 操作正确。
• 设置空白样品 — 空白样品支持准确扣除背景，并可在读数异常偏高时标记试剂或孔板污染。
• 将样品稀释到线性范围内 — 标准曲线两端的值误差较大。请使用多个稀释倍数检测样品，确保至少有一个结果落在线性范围内。

提示

对于动态范围较宽的检测，请将 Fit Method 切换为 logarithmic 或 polynomial，并启用 log(x) Data Transform，以获得更准确的拟合结果。

相关小插件

• 定性 ELISA — 用于定性 ELISA 工作流程的配套小插件；判断分析物是否存在，而不是确定其浓度。如果不需要定量结果，请使用此小插件。
• 剂量-反应曲线 — 对 96 孔板数据执行剂量-反应分析。如果研究目标是效力或抑制浓度（IC50），而不是基于标准曲线的定量，请使用此小插件。

参考资料

• ELISA 数据分析 — ThermoFisher
• ELISA 数据的计算与评估 — Abcam
• 视频教程 — ELISA Standard Curve 小插件使用演示